Оборудование для Вашей лаборатории

Наши партнеры:

Наши контакты:

тел./факс
(4812) 31-08-84,
(4812) 31-74-79,
(4812) 31-74-99.


не, через которые элюирующее средство продавливается под высоким давлением (50—500 бар). Для этого имеются автоматизированные продажные приборы, схема которых представлена на рис. А. 103. Колонка состоит обычно из нержавеющей стали и имеет при аналитических применениях диаметр от 2 до 5 мм. Материалы, используемые для носителей, представляют собой плотную равномерную набивку с высокой разделяющей способностью, благодаря чему вполне достаточны короткие колонки длиной 5—25 см. Их число теоретических тарелок (см. уравнение [А. 105]) составляет от 1000 до 100 000. ВЭЖХ может осуществляться как адсорбционная или распределительная хроматография. Чаще всего применяют обращенные фазы. Для выбора неподвижной фазы и элюента см. разд. А.2.7.

Смесь, подлежащую разделению, впрыскивают шприцем в начало колонки в поток элюента. А элюируемые компоненты в конце колонки регистрируются подходящим детектором. Для детектирования используют соответствующие свойства веществ, которые можно измерить, например флуоресцентное излучение, ионизацию или теплопроводность. В большинстве случаев используют УФ-поглощение при определенной длине волны (например, 254 нм) или показатель преломления.

Разделенные вещества проявляются на хроматограмме в виде пиков определенного расположения и величины, рис. А. 104. Временем удерживания ?r обозначают время, которое проходит от момента ввода пробы до появления максимума пика; чистое время удерживания ?'r — это время удерживания минус время протекания потока ?r = t'R + k. Время протекания потока, или мертвое время /о, — это время, которое необходимо подвижной фазе, чтобы пройти через неподвижную фазу в колонке. При постоянной скорости потока элюента время удерживания можно сопоставить с объемом, который обозначают какудержива-


Ввод проб

Рис. А. 104. Хроматограмма.

емый объем KR. Время удерживания и удерживаемый объем характеристичны для определяемого вещества, как и значение Rp (ср. уравнение А. 100). Они зависят, конечно, от природы неподвижной фазы, длины колонки, природы и скорости пропускания подвижной фазы и от температуры.

Из времени удерживания можно вычислить число теоретических тарелок п, которое так же, как в ректификации (ср. разд. А,2.3.3.1) и противоточном распределении (разд. А,2.5.3), служит мерой эффективности колонки. При постоянных условиях опыта

"=1б(-£)2         [А. 105]

где w — ширина пика у основания.

Площадь пика пропорциональна количеству разделяемого вещества и поэтому привлекается для его количественного анализа. Современные ВЭЖХ-хрома-тографы интегрируют площади пиков автоматически. В приближенном виде ее можно вычислить по методу «треугольника» путем умножения высоты пика h на половину ширины Ь или вырезая пик и взвешивая его. Высота и площадь пика, естественно, зависят и от чувствительности детектора к определенному веществу, например, при УФ-детектировании — от коэффициента экстинкции при использованной длине волны. Связь между площадью пика и количеством вещества следует определять путем построения градуировочного графика, но лучше путем добавления заведомого количества внутреннего стандарта, площадь пика которого может быть соотнесена с площадью пиков исследуемых веществ.


Предыдущая Следующая

Поиск по сайту

Литература

Доставка продукции:

ООО "Автотрейдинг"

Ж/Д перевозка (контейнера)

Собственный транспорт

Любая транспортная компания на Ваш выбор!

Последние материалы