Оборудование для Вашей лаборатории

Наши партнеры:

Наши контакты:

тел./факс
(4812) 31-08-84,
(4812) 31-74-79,
(4812) 31-74-99.

Предыдущая Следующая

х дал -*-ал— цис —глот—глиа—Гасп^прсл--/т!р—да^—прел—дал—гас—а>ал^асп—ал-сер^оал иэол

асп

ал

Ж

~ж

\ лейц

*■ ли! —глут--ал —асп —тре—тре—лиз—тцр—аис— ал— асп—прол—тир—лиз— сер

I сер

гНН

V

^"^* гас — Вам — (рал— трв — асп г— Вал —прол— лиз—иис — арг — асп—лиз — тре—лейц-— Йот-Ь- арг

Рис 8 Строение рибонуклеазы


Принимая в качестве постулата, что пептидная цепь не разветвле­на и аминокислотные остатки соединены друг с другом только амин-ными и карбоксильными группами, авторы составили предварительную1 гипотетическую схему (рис. 8) последовательности аминокислотных остатков в рибонуклеазе.

При эгом они основывались на специфическом действии ферментов. В пептидах, образовавшихся в результате трипсинного гидролиза, С-концевыми аминокислотами являются аргинин и лизин. Пептиды, выделенные из гидролизата рибонуклеазы химотрипсином, содержат » основном в качестве концевых С-аминокислот остатки тирозина и фе-нилаланина.

Определение строения каждого из пептидов при помощи метода динитрофенилирования и метода Эдмана, обработкой лейцинаминопеп-тидазой и карбоксипептидазой, а также гидролизом на более низкомо­лекулярные пептиды позволило постепенно расшифровать всю струк­туру рибонуклеазы, представленную на рис. 8. Существенно, что к аналогичному заключению о отроении рибонуклеазы пришла другая группа исследователей, возглавляемая Аффинсеном. Эти авторы пред­варительно динитрофенилировали рибонуклеазу. При этом наряду с а-аминной группой блокируются и е-аминогруппы лизина, что еще бо­лее увеличивает специфичность трипсина. Так как рибонуклеаза содер­жит только 4 остатка аргинина, то в результате гидролиза было выде­лено 5 пептидов, строение которых устанавливалось частичным гидро­лизом и при помощи описанных ранее методов.

Параллельно с определением последовательности аминокислотных остатков в рибонуклеазе проводилось и определение положения ди-сульфидных мостиков. Спакман, Мур и Штейн нашли, что рибонуклеа­зу можно гидролизовать трипсином и химотрипсином без предваритель­ного окисления дисульфидной связи, если проводить гидролиз в 2-мо-лярном растворе хлоргидрата гуанидина. Ими было получено-6 пептидов, которые затем подвергались окислению иадмуравьиной кислотой и исследовались. Таким образом было установлено, что SS мостики расположены в положениях 1—б, 2—7, 3—8   и 4—5.

Руль и Анфинсен в своей работе по определению положения ди-сульфидных связей использовали способность рибонуклеазы расщеп­ляться субтилизином. Они установили следующие положения S S мостиков: 1—6, 3—7, 8—2 и 4—5. Рибонуклеаза является вторым (после инсулина)  белком, строение которого расшифровано.


Предыдущая Следующая

Поиск по сайту

Литература

Доставка продукции:

ООО "Автотрейдинг"

Ж/Д перевозка (контейнера)

Собственный транспорт

Любая транспортная компания на Ваш выбор!

Последние материалы