Оборудование для Вашей лаборатории

Наши партнеры:

Наши контакты:

тел./факс
(4812) 31-08-84,
(4812) 31-74-79,
(4812) 31-74-99.

Предыдущая Следующая

Однако эти методы применяют в основном для определения строе­ния сравнительно коротких пептидов, получаемых в результате частич­ного гидролиза. Недавно было произведено последовательное отщепле­ние аминокислотных остатков у папаша с помощью лейцинамшюпепти-'дазы. Однако основным путем и до настоящего времени является частичное расщепление пептида или белка на отдельные пептиды и определение их строения. Из сопоставления полученных данных дела­ется заключение о строении соединения. При этом исследователь напо­минает археолога, который воссоздает здание по найденным обломкам. Преимущество исследователя в сравнении с археологом заключается в том, что с помощью синтеза он может проверить справедливость своих заключений.

Частичный гидролиз белка проводят кислотами или ферментами. Часто оказывается целесообразным начинать гидролиз с разрушения дисульфидных мостиков цистина. Зангер предложил обрабатывать бел­ки надмуравьиной кислотой, в результате чего дисульфидная группа окисляется количественно до сульфогруппы и в гидролизате вместо цистина  обнаруживается  цистеиновая кислота.

сн2

I

t

s s

CH(NH2)COOH               CH2-CH(NH2)COOH

S03H нсооон

so3h

сн2ch(nh2)cooh           ch2—ch(nh2)cooh

вы.


Если белок состоял из нескольких цепей, связанных дисульфидиы-ми мостиками, то такая обработка позволяет разделить белки на от­дельные цепи, а затем исследовать каждую из цепей самостоятельно. Этим методом можно также определить, расположены ли дисульфидные мостики внутри одной цепи или между несколькими цепями. При окис* лении в первом случае молекулярный вес соединения остается неиз­менным. Метод был впервые применен Зангером для исследования инсулина.

Наряду с цистеином надмуравьиная кислота окисляет триптофан и метионин. Метионин окисляется до сульфона, продукты окисления триптофана не установлены (см. стр. 474).

В качестве окислителей можно применять также бромную воду и
надуксусную кислоту. Требования, предъявляемые к гиДролизующим
агентам, при частичном гидролизе белков более строгие, чем при их
полном расщеплении до аминокислот. Так же, как при полном гидро­
лизе, эти агенты должны вызывать возможно меньшее число побочных
реакций. Гидролиз должен быть по возможности специфичным, т. е.
расщеплять пептидные связи избирательно. Гидролизующий агент не
должен вызывать вторичных процессов, например, синтеза пептидов'
или образования циклических соединений. Кислотный Гидролиз обычно
проводят при 20—37° 11 —
12N НС1 или 10V HsS04, часто с добавлением
СН3СООН в соотношении 3:1. Скорость расщепления пептидных свя­
зей в значительной степени зависит от аминокислотных остатков. Легче
iBcero разрываются сериловые и глициловые связи, а также пептидные
связи, образованные аспарагиновой и глутаминовой кислотами. Дипеп-
тиды гидролизуются труднее, чем полипептиды с более длинной цепью,
и они обычно накапливаются в гидролизате.
                                                 > '


Предыдущая Следующая

Поиск по сайту

Литература

Доставка продукции:

ООО "Автотрейдинг"

Ж/Д перевозка (контейнера)

Собственный транспорт

Любая транспортная компания на Ваш выбор!

Последние материалы