Оборудование для Вашей лаборатории

Наши партнеры:

Наши контакты:

тел./факс
(4812) 31-08-84,
(4812) 31-74-79,
(4812) 31-74-99.

Предыдущая Следующая

I      I

II                                      CS     CO

\/

NH

Большое значение приобрели в последнее время ферментативные методы, которые позволяют не только устанавливать N- и С-концевые аминокислотные остатки, но и чередование их в пептиде и белке.

Для определения N-концевой аминокислоты пользуются лейцинами-нопептидазой, выделяемой из слизистой оболочки кишечника. Лейцин-аминопептидаза расщепляет экзопептидную связь, образованную ами­нокислотным остатком, содержащим свободную аминогруппу. При этом   происходит ступенчатая   деградация   пептида.

аминопептидаза
NH2CH(R)CONHCH(R)CONHCH(R)CO . . .--------------- >

NHj2CH(R)COOH+NH2CH(R)CONHCH(R)CO ... и далее

£ЛЛ


Методы определения С-концевых аминокислот пептидов и белков менее разработаны. Следует остановиться на трех способах.

1.    Селективное восстановление карбоксильной группы. При обра­
ботке пептида или его эфира мягкими восстановителями
L1AIH4, LiBH4,
А1Н3 карбоксильная группа восстанавливается до спиртовой. Восста­
новленный пептид подвергают гидролизу и в гидролизате наряду с
аминокислотами обнаруживают аминоспирт, соответствующий концевой
С-аминокислоте. Его можно извлечь в органический растворитель и
определить хроматографически или превратить в пикрат или динитро-
фенильное производное:

. . . NHCH(R)CO-NHCH(R)C0-NHCH(R)C00H-(-LiAlH4 -

. . . NHCHCRJCO-NHCHCRJCO-NHCHCRjCHjOH-------- >

. . . NHjC^RJCOOH+NH^HCRlCOOH+NHaCHCRjCHaOH"

Детальное изучение реакция показало, что LiAlH4 может при длитель­ном воздействии и более жестких условиях восстанавливать и пептид­ную связь.

2.   Гидразинолиз — метод Акабори.

Амиды кислот реагируют с гидразином, образуя гидразиды кислот и аммиак.

RCHj—CONH2-(-NH2-NH2--------- RCHs-CONHNHj+NHa

Пептиды реагируют также пептидной группой с образованием гидра-зидов аминокислот. Не вступает в реакцию только С-концевая амино­кислота, поскольку карбоксильная группа не реагирует с гидразином.

КНг-СН—CONH—СН—CONH—СН—CONH—СН—COOH+NH2—NH2—►
I                 I                 I                 I

R                R'                R"                R'"

NH2СН—CONH«+NHEH#*^-CH-CONHNH2+NH2—CH- CONHNH2+NH2-CH-COOH

Для отделения аминокислоты от гидразидов аминокислот смесь обрабатывают альдегидом, который образует с гидразидами трудно­растворимые гидразоны. С-концевую аминокислоту определяют хрома­тографически. Этим методом не всегда удается получить хорошие ре­зультаты. Реакция проводится в сравнительно жестких условиях, при которых частично распадаются цистин, аспарагин, глутамин и аргинин. Все же этот метод является одним из широко применяемых.


Предыдущая Следующая

Поиск по сайту

Литература

Доставка продукции:

ООО "Автотрейдинг"

Ж/Д перевозка (контейнера)

Собственный транспорт

Любая транспортная компания на Ваш выбор!

Последние материалы