Оборудование для Вашей лаборатории

Наши партнеры:

Наши контакты:

тел./факс
(4812) 31-08-84,
(4812) 31-74-79,
(4812) 31-74-99.


Гидролиз белков ферментами пищеварительного тракта применяет­ся 'главным образом для проведения неполного ступенчатого расще­пления. Полученный тем или иным способом гидролизат содержит смесь аминокислот и аммиак, образовавшийся в -результате расщепления аспарагина и глутамина и частичного дезаминирования пептидов и аминокислот. После предварительного удаления основной массы кисло­ты или щелочи гидролизат подвергают фракционному разделению на аминокислоты. В течение первых двух десятилетий текущего столетия аминокислоты разделяли в виде их эфиров, которые подвергали пере­гонке в вакууме (метод Э. Фишера). Позднее этот метод потерял свое значение из-за сложности выполнения и необходимости применения большого количества белка. В настоящее время благодаря появлению метода газовой хроматографии, применение эфиров аминокислот, возможно, вновь окажется интересным.

Разработанные впоследствии колориметрические методы определения аминокислот сильно продвинули наши сведения об аминокислотном составе белков. Но и для осуществления этими методами требоваюсь много  времени  и  значительное количество  вещества.

Только благодаря появившимся в начале 40-х годов новым мето­дам, вопрос об определении аминокислотного состава получил свое полное и окончательное разрешение. В настоящее время основными способами такого определения являются следующие: 1) распредели­тельная хроматография; 2) ионофорез; 3) электрохроматография; 4) ионообменная хроматография и 5) противоточное распределение. Последним методом пользуются главным образом при разделении пепткдов. Метод распределительной хроматографии на бумаге, разра­ботанный в 1941 г. Гордоном, Мартином и Синджем, положил начало новой  эры  в развитии химии  белка.

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органи­ческим растворителем. Особенность метода распределительной хрома­тографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией аминокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из 'фаз, чаще всего (водную, помещают на какой-нибудь инерт­ный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фа­за,— проходя через первую, извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их коэффициентами распределения. Поло­жение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты к скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина R/ зависит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, рН среды и сорта бу­маги. Чем полярнее аминокислота, тем меньше она растворяется в орга­нических растворителях и тем меньше ее Rf. Увеличение длины угле­родной цепи повышает п . Введение в молекулу полярных групп," например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозин! 0,51. Другие примеры изменения Rf в зависимости от строения аминокисло­ты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси рас­творителей, можно провести достаточно тонкое разделение амино­кислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами: вода — фенол — аммиак; вода—^бутанол — уксусная кислота; бута-нол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одно­мерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rt для каждой из систем   растворителей    оказываются    постоянными    при    соблюдении


Предыдущая Следующая

Поиск по сайту

Литература

Доставка продукции:

ООО "Автотрейдинг"

Ж/Д перевозка (контейнера)

Собственный транспорт

Любая транспортная компания на Ваш выбор!

Последние материалы